Acta Univ. Agric. Silvic. Mendelianae Brun. 2007, 55(5), 23-28 | DOI: 10.11118/actaun200755050023

VYUŽITÍ KULTIVAČNÍCH A BIOCHEMICKÝCH METOD A POLYMERÁZOVÉ ŘETĚZOVÉ REAKCE PRO STANOVENÍ CLOSTRIDIUM TYROBUTYRICUM

Radka Burdychová, Pavla Sládková
Ústav technologie potravin, Mendelova zemědělská a lesnická univerzita v Brně, Zemědělská 1, 613 00 Brno, Česká republika

V syrovém mléku mohou být přítomny anaerobní sporotvorné bakterie rodu Clostridium. Spory těchto mikroorganismů mohou přežívat pasteraci a být příčinou tzv. pozdního duření sýrů. Za původce této vady sýrů byl v nejnovějších studiích označen jediný bakteriální druh, Clostridium tyrobutyricum.
V této práci byly srovnány dvě kultivační metody detekce klostridií máselného kvašení v reálných vzorcích syrového a pasterovaného mléka a v polotvrdých sýrech. Výsledky ukázaly, že je zkumavková metoda vhodná k rychlému orientačnímu stanovení klostridií v mléku a sýrech (v koncentraci 102 KTJ/ml nebo /g), k citlivějšímu průkazu (101 KTJ/ml nebo /g) přítomnosti klostridií v analyzovaném vzorku je vhodnější časově náročnější kultivační metoda.
Pomocí druhově specifické PCR byly všechny presumptivní kolonie narostlé anaerobně na selektivním RCM agaru s polymyxinem B (500 μg/ml) identifikovány jako druh C. tyrobutyricum. Konfirmace pomocí API testů byla v 50 % případů odlišná. Výsledky prokázaly, že je PCR metoda vhodná pro rychlý průkaz přítomnosti C. tyrobutyricum v mléku a sýrech. Lze využít i PCR z jedné bakteriální kolonie.

Clostridium tyrobutyricum, syrové a pasterované mléko, sýr, druhově specifická PCR

Detection of Clostridium tyrobutyricum using cultivation and biochemical methods and polymerase chain reaction

Anaerobic spore-forming bacteria of the genus Clostridium are commonly present in raw milk and some milk products. Their spores can survive pasteurization and can provoke so called late blowing defect in cheese caused by butyric acid fermentation. The only species of the genus Clostridium that is able to provoke late blowing is Clostridium tyrobutyricum.
In this work, two cultivation methods for detection of butyric acid producing clostridia in raw and pasteurized milk and in cheese samples were compared. The results show that tube method is suitable for route identification (in concentration 102 CFU/ml or /g) of clostridia in milk and cheese. The standard cultivation technique is suitable for more sensitive identification (10 CFU/ml or /g). All presumptive colonies grown anaerobically on selective RCM agar with polymyxine B (500 μg/ml) were classified to be of species Clostridium tyrobutyricum using PCR only. The confirmation using API tests were different in 50 % cases. The results show, that described PCR method is suitable for rapid screening of the presence of Clostridium tyrobutyricum in milk and cheese. PCR from one colony is possible to use for the analysis.

Keywords: Clostridium tyrobutyricum, raw and pasteurized milk, cheese, species-specific PCR

Received: July 9, 2007; Published: November 26, 2014  Show citation

ACS AIP APA ASA Harvard Chicago IEEE ISO690 MLA NLM Turabian Vancouver
Burdychová, R., & Sládková, P. (2007). Detection of Clostridium tyrobutyricum using cultivation and biochemical methods and polymerase chain reaction. Acta Universitatis Agriculturae et Silviculturae Mendelianae Brunensis, 55(5), 23-28. doi: 10.11118/actaun200755050023
Share...
Download citation
  • BibTeX (.bib)
  • Bookends (.ris)
  • EasyBib (.ris)
  • EndNote (.enw)
  • EndNote 8 (.xml)
  • ISI WoS (.isi)
  • Medlars (.medlars)
  • Mendeley (.ris)
  • MODS (.xml)
  • Papers (.ris)
  • RefWorks (.txt)
  • RefManager (.ris)
  • RIS (.ris)
  • MS Word (.xml)
  • Zotero (.ris)
    • Open full article

    References

    1. AUSUBEL, F. M., BRENT, R., KINGSTON, R. E., MOORE, D. D., SEIDMAN, J. G., SMITH, J. A., STRUHL, K.: Current protocols in molecular biology. New York: Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience. 1994, 350 p. ISBN 0-47150-338-X.
    2. BERGLE, J. L. a SIVELA, S.: Detection and enumeration of clostridial spores related to cheese quality I classical and new methods. Bulletin of the IDF. 1990, 251: 17-23.
    3. FACKLAM, R. R., COLLINS, M. D.: Identification of Enterococcus species isolated from human infections by a conventional test schneme. J. Clin. Microbiol. 1989, 27: 3340-3343. Go to original source...
    4. GUERICKE, S.: Laktatvergarende Clostridien bei der Kaseherstellung. Deutsche Milchwirtschaft. 1993, 44: 735-739.
    5. HERMAN, L. M. F., DE BLOCK, J. H., WAES, G. M.: A direct PCR Detection Method for Clostridium tyrobutyricum Spores in up to 100 Milliliters of Raw Milk. Appl. Environ. Microbiol. 1995, 12: 4141-4146. Go to original source...
    6. CHENG, S. Y., INGHAM, S. C.: Influence of milk centrifugation, brining and ripening conditions in preventing gas formation by Clostridium spp. in Gouda Cheese. Int. J. Food Microbiol. 2006, 54, 3: 15-24.
    7. KLIJN, N., NIEUWENHOF, F. F. J., HOOLWERF, J. D., VAN DER WAALS, C. B., WEERKAM, P. A. H.: Identification of Clostridium tyrobutyricum as the Causative Agent of Late Blowing in Cheese by Species-Specific PCR Amplification. Appl. Environ. Microbiol. 1995, 61: 2919-2924. Go to original source...
    8. MOCQUOT, G.: Reviews of the progress of Dairy Science: Swiss-type cheese. J. Dairy Res. 1979, 46: 133-160. DOI: 10.1017/S0022029900016940 Go to original source...
    9. NĚMEČKOVÁ, I., PECHAČOVÁ, M., ROUBAL, P.: Semikvantitativní stanovení Clostridium sp. zkumavkovou metodou. Mlékařské listy. 2006, 95: 16-17.
    10. NIEUWENHOF, F. N., KLIJN, N., WEERKAMP, A. H.: Detectic en identificatie van clostridia in kaas met hehulp van DNA-probes. Voedingsmiddelentechnologie. 1994: 16/17: 11-15.
    11. SAMBROOK, J. MACCALLUM, P., RUSSELL, D.: Molecular cloning: a laboratory manual. 3rd. ed. New York: Cold Spring Harbor Lab. Press, 2001, 2344 pp. ISBN 0-87969-577-3.
    12. STADHOUDERS J., HUP, G., NIEWENHOF, F. F. J.: Silage and cheese quality. NIZO Mededeling. 1985, M19A: 1-40.
    13. VAN BEYNUM, J., PETTE, J. W.: Zentralblatt für Bakteriologie, Parasitenkunde, Infektionskrankheiten und Hygiene. 1935. Abteilung II. 93: 198-212.

    This is an open access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License (CC BY NC ND 4.0), which permits non-comercial use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original publication is properly cited. No use, distribution or reproduction is permitted which does not comply with these terms.


    Return to the content